Мышиные моноклональные антитела к изоферменту С пероксидазы хрена: получение и изучение биологических свойств

Галкин А.Ю. , Бесараб А.Б. , Горшунов Ю.В. , Соловьева В.Ф. , Дуган А.М.

2014 / Номер 5 [ Прикладная биохимия и биотехнология ]

Получен оригинальный набор из 15 клонов гибридом, продуцентов моноклональных антител (МАТ) к изоферменту С пероксидазы хрена (ПХ), с использованием в качестве источника лимфоцитов мышей инбредных линий NZB и Balb/c. Проведено углубленное изучение биологических свойств ан- тител: установлена их специфичность, константа аффинности и титр в культуральной жидко- сти. Синтезированы конъюгаты полученных МАТ с щелочной фосфатазой, позволившие провес- ти сравнительную эпитопную характеристику антител. Полученные МАТ направлены к белковой части, углеводным остаткам, а также к простатической группе фермента. Углеводный компо- нент ПХ оказался более иммуногенным для мышей исследуемых линий. Полученные МАТ направ- лены к 5 эпитопным регионам на молекуле ПХ: 3 из них представлены антигенными детерминан- тами белкового происхождения и 2 имеют углеводную природу. Два эпитопных региона, направ- ленных к полипептидной цепи (условно обозначены нами П1 и П2), имеют близкую пространствен- ную локализацию и значительно более сильно отдаленные от третьего эпитопного региона ана- логичной специфичности (П3). Каждый из двух эпитопных регионов, направленных к углеводным остаткам (П4 и П5), представлены двумя эпитопами. Антигенная детерминанта П3, сформиро- ванная полипептидной цепью, имеет близкую пространственную локализацию с эпитопным ре- гионом П5 на углеводной части фермента. Две альтернативные методики определения кон- станты аффинности МАТ (Friguet и Scatchard) являются сопоставимыми, при определении кон- стант аффинности антител к ПХ (коэффициент линейной корреляции между константами аф- финности, определенных различными методами, составил 0,90).

Ключевые слова:

моноклональные антитела; гибридома; пероксидаза хрена; аффинность; эпитоп- ное картирование.

Файлы:

• Реферат (скачать | просмотреть) - скачано 13 раза
• Статья (скачать | просмотреть) - скачано 18 раз